换一批
换一批CD47-shRNA慢病毒载体构建及其介导Hep-2细胞CD47基因沉默效应鉴定
Construction of targeted lentiviral vector shRNA of CD47 gene and its effect of CD47 gene silence in Hep-2 cells
摘要目的 构建CD47靶向shRNA慢病毒干扰载体,并观察其对Hep-2细胞CD47基因的抑制效应.方法 设计CD47靶点特异性的寡核苷酸序列,利用酶切反应合成含特异性系列线性化的pGCSIL-GFP载体,包装293T细胞产生慢病毒并行滴度测定,再转染人喉癌Hep-2细胞,通过实时荧光定量PCR及WesternBlotting检测重组慢病毒对CD47靶基因在mRNA和蛋白水平上的沉默抑制情况.结果 阳性克隆PCR及测序证实针对CD47基因shRNA慢病毒干扰载体构建成功,RT-PCR及Western Blotting检测载体在mRNA和蛋白水平上可抑制喉癌Hep-2细胞的CD47表达.结论 成功构建针对CD47基因的慢病毒干扰载体,为进一步行喉癌CD47基因功能研究提供了较好的实验工具.
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关键词
CD47RNA干扰慢病毒载体构建鉴定Hep-2细胞CD47RNA interferencelentivirus vectorconstruction and identificationHep-2 cells
分类号
R739.65
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2014.09.001
发布时间
2016-01-23
基金项目
江西省自然科学基金资助项目
江西省卫生厅科技计划资助项目
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