换一批
换一批重叠法联合长引物法构建具有HA标签的DJ-1 L166P突变体
Cloning of DJ-1 L166P mutant with HA tag by overlap method combined with long-primer method
摘要目的 通过构建具有HA标签的DJ-1L166P突变体(DJ-1L166P-HA),建立一种快速构建具有标签的突变体的方法——重叠法联合长引物法.方法 PCR分别扩增DJ-1的N端和C端.扩增C端的反向引物D卜1-HA-R包含HA标签的编码序列,是具有60个核苷酸的长引物.然后,DJ-1的N端和C端重叠延伸获得DJ-1L166P-HA全长.最后,克隆DJ-1L166P-HA至质粒pcDNA3.1(+).结果 只需一次连接反应,成功地构建了具有HA标签的DJ-1L166P突变体的重组质粒pcDNA3.1(+)-DJ-1L166P-HA.将该重组质粒转染HEK293细胞后,DJ-1L166P-HA融合蛋白质成功表达.结论 重叠法联合长引物法具有简便、快捷,易掌握等特点,具有良好的应用前景.
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分类号
Q5
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2014.19.002
发布时间
2016-01-23
基金项目
国家自然科学基金
湖南省自然科学基金
中南大学中央高校基本科研业务费-青年助推项目
湖南省科技计划
中南大学大学生创新训练项目
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