胃腺癌细胞中miR-23a靶基因PPP2R5E的鉴定

Identification of miR-23a targeted gene PPP2R5E in gastric adenocarcinoma cell line

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摘要目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-23a的靶基因PPP2R5E.方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将PPP2R5E-3' UTR的特异性序列插入其中,并与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed2-N1及表达miR-23a的质粒共同稳定转染胃腺癌细胞MGC803,稳定转染后提取细胞蛋白,荧光分光光度计进行定量检测.并通过半定量RT-PCR、实时定量PCR检测miR-23a功能受抑制或过表达miR-23a的MGC803细胞或胃腺癌组织中PPP2R5E基因mRNA的表达情况,验证miR-23a对其调控作用.表达siRNA抑制MGC803中PPP2R5E mRNA的表达后,通过MTT和平板克隆形成实验观察其对胃腺癌细胞系MGC803细胞活性和克隆形成能力的影响.结果绿色荧光蛋白的表达量,稳定转染pcDNA3/EGFP-PPP2R5E-3' UTR质粒和miR-23a质粒组明显低于pcDNA3/EGFP-PPP2R5E-3' UTR和pcDNA3共同稳定转染组.miR-23a功能受抑制的胃腺癌细胞MGC803中靶基因PPP2R5E的mRNA表达水平升高;相反,过表达miR-23a的胃腺癌细胞MGC803及胃腺癌组织中靶基因PPP2R5E的mRNA表达水平下降.沉默MGC803细胞中的PPP2R5E后,细胞活性和克隆形成能力均加强.结论 PPP2R5E可能是miR-23a的直接靶基因.