换一批
换一批胰岛素样生长因子结合蛋白7表达质粒的构建及其瞬时转染对SMMC7721肝癌细胞增殖的影响
Construction of pIRES2-ZsGreen1-IGFBP7 and effect of IGFBP7 overexpression on survival ability of SMMC7721 cells
摘要目的 采用TA克隆的方法构建IGFBP7表达载体,考察IGFBP7过表达对SMMC7721细胞生存活力的影响.方法 RT-PCR法调取IGFBP7表达基因,构建pMD19-T Simple-IGFP7载体,测序鉴定后与pIRES2-ZsGreen1质粒进行拼接构建表达质粒;随后表达质粒转染SMMC7721细胞,RTFQ-PCR测定SMMC7721细胞中IGFBP7 mRNA水平,MTT检测IGFBP7表达质粒转染对SMMC7721细胞增殖的影响.结果 IGFBP7 cDNA设计长度为840 bp,电泳结果可在750～1 000bp观察到清晰单一条带,表明成功调取IGFBP7基因;pMD19-TS-IGFBP7载体和pIRES2-ZsGreen1-IGFBP7表达质粒测序结果正确,表明表达质粒构建成功;RTFQ-PCR结果显示IGFBP7转染组细胞IGFBP7 mRNA水平显著升高;MTT结果显示IGFBP7转染组细胞增殖明显下降.结论 成功用TA克隆的方法构建了IGFBP7表达载体,IGFBP7的过表达能显著抑制SMMC7721细胞增殖.
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关键词
TA克隆胰岛素样生长因子结合蛋白7实时荧光定量PCR增殖TA cloninginsulin like growth factor binding protein 7 (IGFBP7)real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (RTFQ-PCR)proliferation
分类号
R73-3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2015.12.003
发布时间
2016-01-23
基金项目
中南大学研究生自主探索创新项目（2013zzts307）
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