Notch1在肌成纤维细胞转化中的作用及表达变化

Function and expressive change of Notch1 during transformation of myofibroblasts

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摘要目的探讨在成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中,Notch1表达的变化规律,以及γ-分泌酶抑制剂(DAPT)抑制Notch信号后,对细胞转化的影响.方法取新出生2～3d SD大鼠的肺组织,用胰酶消化法分离肺成纤维细胞,再将培养至第3代的细胞分为3组:对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)组、TGF-β1+DAPT组.对照组为空白对照,TGF-β1组加入5ng/ml TGF-β1,TGF-β1+DAPT组同时加入5 ng/mlTGF-β1及5μmol/L DAPT.采用免疫细胞化学法对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化进行检测.同时通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达变化.结果 α-SMA免疫细胞化学结果表明,对照组大部分细胞无染色,而TGF-β1组则可见大部分细胞内有黄色和棕黄色颗粒及条纹,DAPT组和对照组无明显差异.对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组Notch1 mRNA表达量分别为(0.278±0.022)、(0.783±0.018)和(0.313±0.029),对照组与TGF-β1组、TGF-β1组与TGF-β1+DAPT组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),对照组与TGF-β1+DAPT组比较差异无统计学意义(P＞0.05).对照组、TGF-β1组、TGF-β 1+DAPT组Notch1蛋白表达量分别为(0.312±0.019)、(0.701±0.026)和(0.345±0.022),组间比较结果同Notch1 m.RNA.结论 Notch1可以促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而促进肺纤维化.