人髓核细胞体外培养及冻存的实验研究

Culture of human nucleus pulposus cells in vitro and cryopreservation

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摘要目的研究颈椎手术所取髓核组织培养髓核细胞的可行性,适合作为种子的代次,冻存复苏是否影响其传代.方法测量传1～5代次髓核细胞免疫组织化学法照片光密度(OD)值,观察胞质内Ⅱ型胶原蛋白含量的差异.通过噻唑蓝(MTT)试验观察冻存(实验组)与未冻存(对照组)髓核细胞增殖活力的差异.通过免疫组织化学法观察冻存对髓核细胞胞质内Ⅱ型胶原蛋白含量的影响.结果 ①采用酶消化法可成功分离并培养出人髓核细胞,传1、2代细胞形态呈短梭型、三角形或多边形,传3代以后,细胞形态逐渐变为长梭型.②Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学法测OD值,传1与2代比较差异无统计学意义(P＞0.05).③实验组细胞胞质内Ⅱ型胶原蛋白免疫组织化学法测得OD值与对照组细胞比较,差异无统计学意义(P＞0.05),实验组细胞与对照组细胞MTT比色法测OD值比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ①经颈椎手术取得的髓核组织,可体外培养出髓核细胞,并可获得传代细胞.②传1、2代髓核细胞胞质内Ⅱ型胶原蛋白含量差异较小,细胞形态分化不明显,适宜做髓核组织工程学种子细胞.③冻存复苏处理未能使髓核细胞胞质内Ⅱ型胶原蛋白含量减少,细胞增殖活力亦未降低.