换一批
换一批摘要目的 构建一种可以实现丁型肝炎病毒(HDV)复制包装的HDV转座子载体.方法 采用分子克隆方法构建含HDV复制子和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)表达框的转座子(PB)载体PB126I3,将构建好的载体转染HuH-7细胞,转染48 h后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,转染48 h后收集细胞上清用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg的表达,质粒转染细胞8.5 d后提取病毒用逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测HDV核糖核酸(RNA)的含量;同时细胞上清病毒浓缩后感染HBV受体钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白(Na+/NTCP)稳定转染的HepG2.N9细胞系并于感染后第7天用免疫荧光检测细胞内HDVδ抗原的表达.结果 HDV复制包装载体PB126I3瞬时转染HuH-7后细胞上清可检测到HBsAg的表达和较高滴度的HDV颗粒,并且该病毒颗粒感染HepG2.N9细胞7 d后细胞内可检测到HDVδ抗原.结论HDV复制包装转座子载体构建成功,为未来HDV的大规模复制包装以及尝试建立HDV稳定转染细胞系提供前期基础.
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关键词
丁型肝炎病毒载体构建复制包装瞬时转染hepatitis D virusvector constructionreplicationpackagingtransient transfection
分类号
R516.6
栏目名称
基础研究·论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2017.11.006
发布时间
2017-07-06
基金项目
国家863青年科学家项目
北京市科技新星项目
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