大鼠骨髓单核细胞的快速分离方法及向破骨细胞的诱导分化

A method about isolation and cultivation of rat bone marrow monocytes and differentiation into osteoclasts

二维码有效期 120s

摘要目的建立一种简便高效的体外分离大鼠骨髓单核细胞的方法,观察其体外生长特性,并诱导其分化为破骨细胞.方法无菌条件下分离出SD大鼠的胫骨和股骨,使用环氧树脂管(EP管)和移液枪头快速分离骨髓组织,再用红细胞裂解液去除红细胞.细胞培养过夜后收集悬浮细胞,加入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)继续培养扩增后得到贴壁的骨髓单核细胞.观察骨髓单核细胞生长过程中的形态学特征;通过细胞计数试剂盒法(CCK-8)测绘细胞的生长曲线;用流式细胞仪检测细胞表面CD1 1b的表达;在加入M-CSF和核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导分化后,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和降钙素受体(CTR)免疫荧光染色鉴定其是否能分化为成熟破骨细胞.结果通过该方法获得的大鼠骨髓单核细胞培养1d后基本呈小圆形,杂细胞较少.3d后细胞数目稍多,两端开始出现触角,5d后数目增多,细胞呈椭圆形,两端触角明显;细胞的增殖依赖于M-CSF;流式结果显示,通过此方法获得的单核细胞纯度较高;TRAP染色和CTR免疫荧光染色结果提示,通过该方法获得的单核细胞可以诱导为成熟破骨细胞.结论通过EP管和移液枪头装置可快速分离获取单核细胞,获得的细胞表型稳定,适合用于骨代谢疾病的进一步研究.