换一批
换一批MicroRNA-29b-3p重组腺相关病毒制备及在大鼠前额叶皮质中的表达研究
Construction of recombinant adeno-associated virus expressing miRNA-29b-3p and its expression in prefrontal cortex of rats
摘要目的 获得表达microRNA-29b-3p的重组腺相关病毒(rAAV-miR-29b-3p),并检测其在大鼠前额叶皮质中的感染效果和表达水平.方法 将前体miR-29b-3p基因片段置入AAV表达质粒中构建重组AAV质粒,将重组AAV质粒、包装质粒和辅助质粒通过脂质体LipaFiterTM共转染HEK293细胞包装rAAV-miR-29b-3p.从转染的HEK293细胞中收集并通过树脂柱纯化rAAV-miR-29b-3p,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定rAAV-miR-29b-3p滴度.通过脑立体定位仪注射rAAV-miR-29b-3p至大鼠前额叶皮质,免疫荧光显微镜观察rAAV-miR-29b-3p的感染效果,qRT-PCR检测rAAV-miR-29b-3p表达水平.结果 成功包装的rAAV-miR-29b-3p经纯化后获得了高纯度的rAAV-miR-29b-3p,qRT-PCR检测rAAV-miR-29b-3p的病毒滴度达到1.0×1012 vg/ml,经感染21 d后,脑组织前额叶皮质荧光表达明显,miR-29b-3p表达水平明显提高.结论 构建的rAAV-miR-29b-3p可使大鼠前脑皮层miR-29b-3p高表达,为进一步研究miR-29b-3p的生物学功能提供了有效工具.
更多相关知识
栏目名称
基础研究·论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2017.25.001
发布时间
2018-03-02
基金项目
国家自然科学基金
- 浏览150
- 被引1
- 下载34
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
