换一批
换一批摘要目的 探讨溶酶体在巨噬细胞极化中的作用.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,用脂多糖(LPS)100 ng/ml+伽马干扰素(IFN-γ)20 ng/ml诱导其向经典活化型(M1)极化,用白细胞介素4(IL-4) 20 ng/ml诱导其向替代活化型(M2)极化,建立巨噬细胞极化模型.以未诱导细胞作为对照组.通过流式细胞术、ELISA、Western blot及实时PCR(real-time PCR)法,检测M1型及M2型巨噬细胞比例及标志物表达,验证巨噬细胞极化模型是否建立成功.通过Western blot、real-time PCR及免疫荧光染色检测M1型及M2型巨噬细胞中溶酶体标志物表达,包括溶酶体膜相关蛋白1、2(LAMP-1、LAMP-2)及溶酶体整合膜蛋白2(LIMP-2).给予溶酶体抑制剂氯喹(chloroquine)25 μmol/L刺激巨噬细胞,流式细胞术检测M1、M2型巨噬细胞比例.结果 成功建立巨噬细胞极化模型.与对照组比较,溶酶体标志物(LAMP-1、LAMP-2及LIMP-2)转录及蛋白水平表达在M1型极化组中降低,而在M2型极化组中增加.溶酶体抑制剂氯喹处理可降低M2型极化比例,增加M1型极化比例.结论 溶酶体参与巨噬细胞极化过程,抑制溶酶体可促进巨噬细胞向M1型极化.
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分类号
R541.4
栏目名称
基础研究·论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2018.06.001
发布时间
2018-03-26
基金项目
国家自然科学基金
辽宁省自然科学基金
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