小窝蛋白-3/RISK介导HBO-PC对心肌的保护作用研究

Hyperbaric oxygen preconditioning exerts myocardial protection through caveolin-3/RISK pathway

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摘要目的探究高压氧预处理(HBO-PC)减轻心肌缺血再灌注(I/R)损伤的具体分子机制.方法对心肌细胞予以HBO-PC处理,并复制缺氧复氧(H/R)模型,用试剂盒测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮NO的含量,Western blot检测促/抗凋亡蛋白、蛋白激酶Cε(PKCε)、小窝蛋白-3(Cav-3)、再灌注损伤挽救激酶(RISK)通路中蛋白及其磷酸化水平的变化,免疫共沉淀和免疫荧光染色检测PKCε 与Cav-3的结合;同时使用PKC抑制剂Chelerythrine(CHE)和RISK通路抑制剂进一步验证HBO-PC对心肌细胞I/R损伤的作用机制.结果 H/R模型模拟I/R损伤过程.HBO-PC降低MDA和LDH含量、Caspase-3活性和Bax的表达,增加SOD和NO含量、Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,减轻I/R损伤.同时,HPO-PC促进PKCε 活化及其与Cav-3的结合,增加Cav-3蛋白表达,以及RISK通路中胞外信号调节激酶(ERK)1/2、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇3-羟激酶(PI3K)和下游效应激酶糖原合酶激酶(GSK)3β 的磷酸化水平;CHE能够抑制HPO-PC的作用.RISK通路抑制剂增加Caspase-3活性和Bax表达,减少Bcl-2表达,阻断HBO-PC对心肌细胞凋亡的拮抗作用.结论 HBO-PC可能通过调控PKCε/Cav-3/RISK通路,抑制心肌细胞凋亡,抵抗心肌I/R损伤,发挥心肌保护作用.