中华眼镜蛇膜毒素12对膀胱癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响

Effects of membrane toxin 12 on proliferation, apoptosis, and autophagy of bladder cancer cells

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摘要目的探讨中华眼镜蛇膜毒素12(MT-12)对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及自噬的影响.方法 ①采用CCK-8法检测不同浓度(0.10、0.25和0.50μg/ml)的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120 h后,对膀胱癌RT4、T24细胞增殖能力的影响;②采用流式细胞术检测MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24 h后,对膀胱癌RT4、T24细胞凋亡的影响,主要观察细胞凋亡率的改变;③Pan-Caspase抑制剂和MT-12处理膀胱癌细胞后通过MTT法检测细胞活力;④通过GFP-LC3转染,观察自噬小体形成,通过Western blotting检测自噬标志物的表达情况.结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120 h后,MT-12能抑制膀胱癌RT4、T24的细胞增殖.流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24 h后,实验组可以增加凋亡细胞的比例.Pan-Caspase抑制剂V-ZAD-FMK对2株膀胱癌细胞系进行处理后,MT-12并未完全失去对膀胱癌的抑制效果.Western blotting和GFP-LC3转染检测结果显示,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,GFP-LC3转染结果自噬体(绿色荧光点)增多.结论 MT-12以浓度-时间依赖的方式抑制膀胱癌RT4、T24细胞的增殖能力,并诱导其调亡;MT-12能够引起细胞的自噬,并且自噬性的死亡可能发生在MT-12对膀胱癌细胞的抑制作用过程中.