TRPV4通道在膝骨关节炎软骨细胞中的功能表达

Functional expression of TRPV4 channels in chondrocytes of knee osteoarthritis

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摘要目的基于瞬时感受器电位离子通道家族(TRP)香草素受体亚家族成员Ⅳ型(TRPV4)的特点,探讨其在人类软骨细胞中的功能性表达,以及对于膝骨关节炎(KOA)的意义.方法人类KOA软骨细胞原代培养.分别用浓度为0、1、10和100 ng/ml,以及浓度为1和10μg/ml的脂多糖(LPS)全培孵育24 h,或用浓度为1μg/ml的LPS全培分别孵育0、4、8、12、24和48 h,qRT-PCR检测软骨细胞TRPV4的基因表达.软骨细胞分为空白组、LPS组、LPS+TRPV4抑制剂组,行实时荧光钙成像观察各组钙离子内流情况,并提取培养上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3及MMP-13水平.结果浓度为1、10、100 ng/ml和1μg/ml的LPS均能增加人类软骨细胞TRPV4通道的基因表达(P<0.05);实时荧光钙成像分别观察20、40和60 s的荧光强度发现:LPS组荧光强度较空白组增加(P<0.05),LPS+TRPV4抑制剂组荧光强度较LPS组降低(P<0.05);此外,LPS组的MMP-1、MMP-3及MMP-13水平高于空白组(P<0.05),而LPS+TRPV4抑制剂组低于LPS组(P<0.05).结论在KOA的炎症环境下,TRPV4不仅存在表达量升高,还存在功能表达增强.TRPV4通道可能通过影响MMP-1、MMP-3及MMP-13的表达水平参与KOA软骨降解的过程.