换一批
换一批摘要目的为减轻实验者用磁珠提取肾小球的经济负担,对传统的心脏灌注肾脏提取方法进行改良.方法结扎远端腹主动脉及下腔静脉,结扎肠系膜上动脉和腹腔动脉,以减少磁珠分流.将磁珠工作液经静脉留置针灌注肾脏.加入相应体积胶原酶A,通过100μm筛网2次,加入蛋白裂解液,离心裂解吸出含蛋白上清进行肾小球蛋白的纯化、定量.结果与传统的心脏灌注肾脏提取方法比较,改良胸主动脉灌注肾脏提取肾小球方法磁珠用量仅为原来的1/35～1/40.在获取相同的蛋白情况下,提取肾小球的最佳浓度为4×106磁珠/ml,磁珠用量为20 ml.通过该方法灌注分离的肾小球完整,纯度为(95.7±2.3)％.结论改良的胸主动脉灌注肾脏是一种简单经济实用磁珠提取肾小球的实验方法,可以快速获取大量完整的肾小球,蛋白质甚至RNA,为肾小球本身的研究提供新的技术支持.
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