换一批
换一批结直肠癌细胞β-catenin蛋白脱酰胺化修饰的实验研究
Identification of deamidation modification of β-catenin in colorectal cancer cell lines
摘要目的 鉴定结直肠癌细胞β-catenin的脱酰胺化修饰及其相关脱酰胺化酶.方法 采用二维电泳结合脱酰胺化抑制剂6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(DON)方法鉴定内源性β-catenin蛋白脱酰胺修饰的存在.通过β-catenin蛋白的纯化与质谱分析筛选出β-catenin蛋白候选可能的脱酰胺化酶.利用免疫共沉淀实验检测候选脱酰胺化酶与β-catenin蛋白的相互作用.结果 二维电泳在结直肠癌细胞系HCT116中鉴定出β-catenin蛋白可以发生脱酰胺化修饰.成功构建pEE14.4-β-catenin质粒表达载体,并且在细胞中成功验证其表达;利用蛋白纯化结合质谱分析鉴定出β-catenin蛋白的候选脱酰胺化酶——谷氨酰胺酶复合酶(CAD);Western blotting再次验证CAD能够与内源性β-catenin蛋白发生相互作用.结论 结直肠癌细胞β-catenin蛋白能够发生脱酰胺化修饰,CAD蛋白可能为介导β-catenin蛋白脱酰胺化修饰的相关酶.
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分类号
R735.3
栏目名称
实验研究·论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2023.14.006
发布时间
2023-08-28
基金项目
湖南省自然科学基金项目
长沙市科技计划项目
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