腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响
Role of adenosine A3 receptor in regulating cAMP/Epac signaling pathway and expression of inflammatory molecules in superficial fascia fibroblasts
摘要目的 探讨沉默腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响.方法 选取SD大鼠浅筋膜组织,通过组织块培养法提取成纤维细胞,细胞免疫荧光实验检测Vimentin、CD45、FⅧ、AKA表达,腺苷预处理细胞并分为 Control组、10 nmol/L组、100nmol/L组、10 μmol/L组和 100 μmol/L组,均培养48 h.腺苷siRNA干扰实验将细胞分为对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组.对照组不予任何处理,腺苷组用10 μmol/L腺苷培养48 h,其余两组用2 μL Lipofectamine 2000转染A3R siRNA,在培养箱孵育6 h后换上维持液继续培养48 h.Western blotting检测细胞腺苷A3受体蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测cAMP、EpacmRNA表达,Western blotting检测cAMP、Epac蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫荧光检测细胞间黏附分子-1表达.结果 Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10 μmol/L组和100 μmol/L组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),腺苷预处理可剂量依赖性地上调A3R蛋白表达.对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),腺苷siRNA干扰可下调A3R蛋白表达,而空载组并无明显影响.A3R干扰组cAMP、Epac mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05).A3R干扰组cAMP、Epac蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05).A3R干扰组IL-6、TNF-α相对表达量高于对照组(P<0.05).结论 在浅筋膜成纤维细胞中,腺苷A3受体通过下调cAMP/Epac信号通路减少炎症因子的表达.
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