MicroRNA-105-5p/PPM1A对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究
Mechanistic study on the role of microRNA-105-5p/PPM1A in the proliferation,migration,and invasion of pancreatic cancer PANC-1 cells
摘要目的 探讨microRNA-105-5p(miR-105-5p)/PPM1A对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭及上皮细胞向间质转化(EMT)进程的影响及其潜在作用机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-105-5p在人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE和胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中的表达.利用Kaplan-Meier Plotter在线工具探讨miR-105-5p与胰腺癌患者预后的关系.在PANC-1细胞中分别转染mimic NC、miR-105-5p mimic、inhibitor NC、miR-105-5p inhibitor.CCK-8 法、划痕实验、Trans well 实验分别 检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力;qRT-PCR检测miR-105-5p对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1表达的影响.生物信息学方法预测miR-105-5p的候选靶基因,并对候选靶基因进行GO和KEGG富集分析.双萤光素酶实验检测miR-105-5p与PPM1A的靶向关系.qRT-PCR检测在PANC-1细胞中分别转染mimic NC、miR-105-5p mimic、inhibitor NC、miR-105-5p inhibitor 后 PPM1A 的表达.免疫荧光实验检测PPM1A在人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE和胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中的表达.在PANC-1 细 胞中分 别转染 mimic NC+pcDNA3.1、mimic NC+pcDNA3.1-PPM1A、miR-105-5p mimic+pcDNA3.1-PPM1A后,通过挽救实验进一步研究miR-105-5p inhibitor与PPM1A在胰腺癌细胞中的相互作用关系.结果 胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中miR-105-5p mRNA相对表达量高于hTRET-HPNE细胞中miR-105-5p mRNA相对表达量(P<0.05),以PANC-1细胞中的相对表达量最高.miR-105-5p高表达与胰腺癌患者的不良预后有关(P<0.05).miR-105-5p mimic组细胞增殖、迁移及侵袭能力均高于mimic NC 组(P<0.05).与 mimic NC 比较,miR-105-5p mimic 下调 E-cadherin mRNA 表达,上调 N-cadherin、Vimentin、ZEB1 mRNA表达(P<0.05).转染miR-105-5p inhibitor后得到相反的结果.双萤光素酶实验证实miR-105-5p与PPM1A存在靶向关系.免疫荧光实验显示在胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1、Bxpc-3中PPM1A的荧光强度低于人胰腺导管上皮细胞hTRET-HPNE(P<0.05).挽救实验表明miR-105-5p可部分挽救PPM1A对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05).结论 miR-105-5p靶向PPM1A促进胰腺癌PANC-1细胞的增殖、迁移及侵袭.
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