换一批摘要[目的]实现A型塞内卡病毒(Seneca virus A,SVA)VP1蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达,以建立SVA抗体液相芯片技术检测方法.[方法]根据GenBank收录的SVA VP1基因序列(登录号:KY747514.1),基于大肠杆菌的密码子偏好性优化合成VP1基因,克隆到pCold TF载体,构建重组质粒pCold TF-VPl.将重组质粒pCold TF-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,进行IPTG诱导表达.通过优化诱导时间及IPTG浓度得出最佳诱导表达条件.采用His标签镍柱纯化VP1重组蛋白,将纯化后的SVA VP1蛋白与荧光微球进行偶联,偶联好的微球与阴阳性血清反应,利用Luminex 200系统上机检测背景及阴阳性血清的中值荧光强度(MFI),从而判断阴阳性,以用于猪血清中SVA抗体的检测.[结果]重组质粒pCold TF-VP1成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞,并以可溶性蛋白形式表达.经诱导表达在约82 ku处出现阳性条带.当重组菌株诱导条件为16℃、IPTG终浓度为1.2 mmol/L、诱导时间为3 h时,VP1蛋白表达量最高;经Western blotting分析,可在82 ku处出现明显条带.将VP1蛋白与荧光微球偶联,阴性对照(背景)的平均荧光值为17(＜100).测试孔的平均MFI为2 339.5(＞2 000),证明SVA VP1蛋白与微球偶联成功,偶联成功的荧光微球可用于检测猪血清中SVA抗体的检测.[结论]本研究在大肠杆菌中成功表达并纯化了 SVA VP1蛋白,初步建立了 SVA抗体液相芯片检测方法,为后续研究奠定了基础.
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分类号
S852.65+1
栏目名称
DOI
10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.07.029
发布时间
2022-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山东省生猪产业技术体系（SDAIT-08-07）
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