武定鸡GHRL基因克隆、组织表达及多态性分析
Cloning,Tissue Expression,and Polymorphism Analysis of GHRL Gene in Wuding Chicken
摘要[目的]克隆武定鸡胃饥饿素(ghrelin,GHRL)基因,阐明其组织表达差异及其功能性单核苷酸多态性(SNP)位点对生长性状的影响.[方法]克隆武定鸡GHRL基因编码区(CDS)并进行生物信息学分析,探究其分子结构和功能特性;利用实时荧光定量 PCR检测GHRL基因在不同发育阶段(50、120和365日龄)不同组织中的表达差异,通过PCR产物直接测序技术检测GHRL基因内含子3、外显子4(652 bp)区域的SNP位点,分析其与武定鸡生长性状的关联性.[结果]成功克隆武定鸡GHRL基因CDS序列,其长度为351 bp,编码116个氨基酸.生物信息学分析显示,GHRL蛋白为亲水性不稳定蛋白,含有信号肽序列和跨膜结构域,且该蛋白包含Motilin_ghrelin和Motilin_assoc 2个保守结构域.实时荧光定量PCR结果显示,不同日龄武定鸡GHRL基因在腺胃中表达量显著高于其他组织(P<0.05),且120日龄时表达量显著高于50、365日龄(P<0.05).在GHRL基因内含子3中检测到 3 个 SNPs 位点(g.4374 C>T、g.4375 C>T、g.4431 G>T),在外显子 4 中检测到1 个SNP(g.4629 G>A)为异义替换.关联分析结果显示,g.4374 C>T和g.4629 G>A位点与武定鸡公鸡胫长及母鸡龙骨长和胸角显著相关(P<0.05).[结论]武定鸡GHRL基因在调节食欲和能量代谢、促进生长激素分泌和释放方面具有重要作用,其多态性与生长性状显著相关.研究结果为武定鸡的分子育种提供了重要理论依据.
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