换一批高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒ORF1a、ORF1b、ORF2-ORF7片段互换嵌合病毒的构建及其生物学特性的分析
Generation and biological characterization of chimeric viruses which substituted ORF1a, ORF1b, ORF2-7 between highly pathogenic porcine reproductive and respiratory virus and its attenuated vaccine virus
摘要为研究高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)强弱毒之间毒力差异的分子基础,本实验分别以HP-PRRSV强毒HuN-F5株及其传代致弱的疫苗病毒株HuN4-F112为亲本病毒,利用反向遗传操作技术分别将ORF1a、ORF1b或ORF2-7编码序列在强弱毒之间互换.将6种含有不同嵌合基因的全长病毒基因组的重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞,然后在Marc-145细胞中传代,拯救的重组病毒经RT-PCR、测序和免疫荧光鉴定,并分别命名为rHuN4-F5-ORF1a、rHuN4-F5-ORF1b、rHuN4-F5 -ORF2-7(以强毒为骨架)和rHuN4-F 112-ORF1a、 rHuN4-F112-ORF1b、rHuN4-F 112-ORF2-7(以弱毒为骨架).进一步测定这些病毒在Marc- 145上的生长曲线,结果显示:以强毒为骨架的嵌合病毒rHuN4-F5-ORF1a生长滴度显著高于亲本强毒rHuN4-F5,而以弱毒为骨架的嵌合病毒rHuN4-F 112-ORF1a在细胞上的生长滴度低于其亲本弱毒rHuN4-F112,其他片段替换对病毒在细胞上的生长没有明显影响.本实验结果提示ORF1a对于PRRSV在体外细胞培养上的生长调节起重要作用.
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分类号
S852.65
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1008-0589.2012.01.01
发布时间
2012-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31100121）
NSFC-广联合基金项目（NSFC;U0931003）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2011AA10A208）
上海市重点基础项目（09XD1405400）
国家国际科技合作专项基金（2010DFB33920）
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（2011JB03）
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