换一批随机转座子插入构建甲型副伤寒杆菌启动子文库
Construction of a Promoter Library of Salmonella paratyphi A by Inserting Transposon
摘要目的 构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库.方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携带pSC-CAT的供体菌与副甲受体菌进行接合转座,涂布氯霉素平板筛选转座的细菌,以随机筛选出来的细菌基因组为模板,热不对称PCR扩增插入位点侧翼序列,并进行测序、比对分析.结果 筛选获得约l 000个突变菌,随机挑取6个菌,转座子插入位点的上游分别对应6个可疑启动子区域.结论 通过自杀性转座子载体pSC-CAT可高效获得副甲菌启动子文库,为进一步研究副甲菌基因表达与调控奠定了基础.
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关键词
甲型副伤寒沙门氏菌氯霉素乙酰转移酶pSC189接合转移转座Salmonella paratyphi Achloramphenicol acetyltransferasepSC189conjugate transpose
主题词
副伤寒(Paratyphoid Fever)氯霉素O-乙酰转移酶(Chloramphenicol O-Acetyltransferase)肿瘤转移(Neoplasm Metastasis)自杀(Suicide)目的(Goals)
分类号
R378.2
栏目名称
DOI
10.12007/j.issn.0258-4646.2016.01.002
发布时间
2016-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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