换一批靶向Tak1基因的siRNA干扰对小鼠腹腔巨噬细胞的生物学效应
The biological effect of Tak1 knockdown in mouse peritoneal macrophage by Tak1 siRNA transfection
摘要目的 通过小干扰RNA(siRNA)使小鼠腹腔巨噬细胞Tak1基因沉默,观察Tak1基因对腹腔巨噬细胞细胞因子释放的影响.方法 以靶向Tak1基因的siRNA作为实验组,同时设立空白对照组,瞬时转染昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光定量PCR技术定量检测Tak1 mRNA表达水平;采用Western blotting技术测定Tak1表达抑制情况,进而实现Tak1 siRNA干扰作用的优化;并观察LPS攻击后腹腔巨噬细胞IL-1β的表达水平.结果 细胞分别转染0.6、1.2、1.6 μmol/L Takl siRNA,mRNA抑制率为69.73%、80.85%、88.78%,最佳转染浓度为1.6μmol/L.Tak1蛋白在转染48h出现良好沉默效果,以1.6 μmol/L siRNA效果最好.转染后小鼠腹腔巨噬细胞在100 ng/ml LPS刺激下,细胞因子IL-1β分泌水平明显升高(P＜0.01).结论 靶向Tak1基因的siRNA具有较好的靶基因沉默效果.
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