换一批差速离心法联合聚乙二醇6000富集脂肪间充质干细胞来源的外泌体
Enrichment of exosomes from adipose mesenchymal stem cells by differential centrifugation combined with polyethylene glycol 6000
摘要目的 探讨通过聚乙醇6000(PEG 6000)富集分离外泌体,优化改善外泌体的分离产量.方法 使用不同浓度PEG 6000分离外泌体,通过Western blot检测CD63的蛋白表达情况,筛选出最适浓度的PEG 6000.以差速离心法分离出的外泌体为对照组,以最适浓度PEG 6000分离出的外泌体为实验组,比较两者之间的外泌体粒径、数量,蛋白水平(CANX、CD81、TSG101)的表达情况和miRNA(miR-133b和miR-124-3p)的表达情况.结果 使用不同浓度PEG 6000分离外泌体,12％PEG 6000分离出的外泌体产量最多,最终筛选最适PEG 6000浓度为12％ 完成后续实验.12％PEG 6000分离的外泌体和差速离心法分离出的外泌体作比较,前者的外泌体产量为1.35×108个/ml培养基,后者的外泌体的产量为6.8×107个/ml培养基.从蛋白水平(CANX、CD81、TSG101)的表达情况来看,同体积上样量和同蛋白上样量,PEG 6000分离的外泌体的蛋白表达水平远高于差速离心法分离出的外泌体.从miRNA(miR-133b和miR-124-3p)的表达情况来看,PEG 6000分离的外泌体的miR-133b和miR-124-3p表达水平远高于差速离心法分离出的外泌体.PEG 6000分离出的外泌体并不会影响成纤维细胞对其进行摄取,而且PEG 6000分离出的外泌体的产量远比差速离心分离出的外泌体的产量多.结论 12％PEG 6000分离出的外泌体的产量优于差速离心法分离出的外泌体,且不影响外泌体的稳定性.
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