换一批HPLC法测定红细胞中6-硫鸟嘌呤核苷酸和6-甲基巯嘌呤的浓度及其在炎症性肠病患者治疗药物监测中的应用
HPLC method for the determination of 6-TGN and 6-MMP in red blood cells and its application in the thera-peutic drug monitoring for patients with inflammatory bowel disease
摘要目的:建立高效液相色谱法(HPLC-UV)测定人红细胞中硫唑嘌吟代谢物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-TGN)和6-甲基巯嘌吟(6-MMP)的浓度,用于炎症性肠病患者治疗药物监测.方法:300 μL红细胞裂解液加入二硫苏糖醇溶液(0.5 mol·L-1)60μL,40 μL高氯酸(70％)沉淀蛋白后,酸性条件下6-TGN水解生成6-硫鸟嘌吟(6-TG),6-MMP水解反应生成4-氨基-5-(甲硫基)羰基咪唑.Diamonsil C8(2)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇/20mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.1％磷酸),梯度洗脱,流速0.95 mL·min-1,柱温30℃,6-TG、6-MMP检测波长分别为340 nm和303 nm.结果:6-TG在0.12～12μmol·L-1、6-MMP在0.3～30 μmol·L-1浓度范围内线性关系良好,批内、批间精密度及准确度满足要求,成功用于炎症性肠病患者的治疗药物监测.结论:本文考察了影响6-TGN和6-MMP水解反应的重要因素,开发出稳健、快速、操作简便的HPLC-UV法,可用于常规监测炎症性肠病患者红细胞中6-TGN及6-MMP浓度,为硫嘌吟类药物个体化治疗提供依据.
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