换一批
换一批摘要篇首： 我们最近发现蛋白激酶C(PKC)参与正常肺血管张力的调控［1，2］；低氧可使肺动脉PKC蛋白水平表达增高［3］，且可使PKC对肺血管张力的调控作用明显增强［4］。但有关低氧对肺动脉平滑肌细胞（PASMC）在mRNA转录水平表达的影响以及PKC对PASMC增殖的影响的研究报道尚较少见，我们对此进行探讨。 材料与方法取幼年猪肺动脉主干，刮去内皮细胞，将中膜肌层切割成小组织块，接种在培养瓶内，待贴壁后，加入含10%胎牛血清的M199液，置37℃，CO2培养箱内培养。生长融合的PASMC以1∶1的0.25%胰蛋白酶和0.04%乙二胺四乙酸（EDTA）混合消化，按1∶2分装、接种。根据细胞生长呈典型的“峰与谷”结构及免疫荧光α平滑肌肌动蛋白（α-SM actin）阳性鉴定为平滑肌细胞。取3～5代，在5%氧浓度下分别培养0、1、24、48和72 h。 斑点杂交方法：按TRIzol试剂盒要求用一步法提取总RNA，校正各组RNA浓度为1 μg/ μl。每组取10 μl 样本，用96孔点样器点膜，按试剂盒说明进行预杂交和杂交。cDNA探针由载有兔PKC-α cDNA片段的质粒（日本横滨市立大学医学部大野茂男教授馈赠）经PCR扩增为307 bp片段，用地高辛试剂盒标记。结果用TJTY-300型全自动图像分析仪进行分析。
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分类号
R56
栏目名称
DOI
10.3760/j:issn:1001-0939.2001.03.018
发布时间
2004-01-15
基金项目
国家自然科学基金（39770341）；
教育部科学技术研究项目（436）
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