定量聚合酶链反应技术研究进展

Development of quantitative polymerase chain reaction technique

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摘要篇首：自Mullis等于1985年创建了聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术以来，该技术经过十几年的发展与完善，已在基础研究领域得到了广泛的应用，并在临床疾病的诊断方面进行了一些探索性研究。根据PCR扩增策略和检测产物手段的不同，可分为定性PCR(qualitative PCR，以下简称PCR)和定量PCR(quantitative PCR，Q-PCR)。一、PCR在结核分支杆菌检测中的研究现状 1989年Hance等［1］将PCR用于结核分支杆菌的检测，1990年我国引进该项技术，从而在我国开辟了以PCR为代表的分子生物学技术检测结核分支杆菌阶段。该方法的敏感性和特异性与扩增系统中的引物、模板DNA的提取及纯化等多种因素有关，其中很大程度上决定于扩增的引物，因此，检测结核分支杆菌时各家采用过多种不同引物。PCR具有很高的敏感性，一般可检测出1～100 fg纯化结核分支杆菌DNA［2，3］，相当于1～20个结核分支杆菌。随着研究技术的不断深入，为了进一步提高PCR的敏感性，有些学者对PCR技术进行了发展，如将Southern blot与PCR结合起来的PCR-Southern blot、巢式PCR(nested PCR)技术等。