噬菌体生物扩增法、DNA序列分析及单链构象多态性分析检测结核分枝杆菌耐药性

Analysis and evaluation of phage amplified biologically assay,DNA sequencing analysis and single-strand conformational polymorphism for the drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis

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摘要目的探讨和评价噬菌体生物扩增技术(phage amplified biologically assay, PhaB)用于检测结核分枝杆菌耐药性的应用价值. 方法本研究共选取了91株利福平(RFP)耐药株(其中82株为耐多药结核分枝杆菌)、42株RFP敏感株、75株氧氟沙星(OFLX)耐药株、40株OFLX敏感株,应用PhaB、DNA序列分析法和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)3种检测方法,同时对同一菌株应用该3种方法进行耐药性检测,以资分析与评价PhaB法的临床应用价值.结果以绝对浓度法药敏试验结果为标准,检测RFP的药物敏感性,PhaB法的准确性为93%,敏感性为92%,特异性为95%;DNA序列分析法的准确性为93%,敏感性为90%,特异性为100%;PCR-SSCP法的准确性为90%,敏感性为86%,特异性为100%.检测OFLX(OFLX)的药物敏感性,PhaB的准确性为95%,敏感性为95%,特异性为95%;DNA序列分析法的准确性为80%,敏感性为71%,特异性为98%;而PCR-SSCP法的准确性为75%,敏感性为63%,特异性为98%.结论 PhaB法是一种操作简便、快速、敏感、与绝对浓度法符合率高的结核分枝杆菌耐药性检测方法,在48～96 h内可获得试验结果,具有良好的临床应用前景.