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香烟对气道上皮细胞表达4-羟基壬烯醛的影响以及银杏内酯B的干预作用

The expression of 4-hydroxy-2-nonenal caused by cigarette smoke condensate exposure in human bronchial epithelial cells and the interventional effects of ginkgolid B

摘要目的探讨香烟烟雾浓缩物(CSC)对人类支气管上皮细胞系(16-HBE)表达4-羟基壬烯醛(4-HNE)的影响以及银杏内酯B的干预作用;并观察4-HNE对中性粒细胞的趋化作用.方法采用免疫细胞化学和Western blot方法.(1)不同浓度(1、10 μg/ml CSC)CSC刺激16-HBE细胞4 h后4-HNE加成蛋白的表达水平,设正常对照组(无血清培养基代替CSC);(2)10 μg/ml CSC刺激不同时间(1、4、8、12、24、30 h)后,16-HBE中4-HNE加成蛋白的水平,设正常对照组(无血清培养基代替CSC);(3)用100 μmol/L银杏内酯B孵育16-HBE后,CSC刺激1、4、8、12 h,检测4-HNE加成蛋白表达的变化,设正常对照组(无银杏内酯B孵育);(4)以趋化实验检测0.1、1、10 μmol/L 4-HNE对兔中性粒细胞的趋化作用.结果 (1)1、10 μg/ml CSC刺激4 h后,16-HBE细胞表达4-HNE加成蛋白水平(免疫化学为2.12±0.38、2.69±0.42,Western blot为100.2±6.3、72.3±6.1)均较正常对照组显著增加(免疫化学为1.25±0.37,Western blot为122.4±4.2,P均<0.01).(2)10 μg/ml CSC刺激1、4、8、12、24、30 h后,16-HBE细胞表达4-HNE加成蛋白(免疫化学为2.67±0.46、2.69±0.42、2.71±0.48、2.72±0.56、2.93±0.11、2.92±0.20,Western blot为73.2±8.3,72.3±6.4,72.6±9.2,71.5±8.1,54.4±3.6,56.7±4.4)较正常对照组(免疫化学为1.25±0.35,Western blot为122.4±4.1)显著增加(P均<0.01),刺激24 h和30 h,细胞内4-HNE加成蛋白较其他时间点增加.(3)50、100 μmol/L银杏内酯B孵育后再以CSC刺激时,16-HBE细胞内4-HNE加成蛋白表达水平(Western blot为84.6±4.4、101.2±4.4)明显低于未以内酯B孵育组,但高于正常对照组(Western blot为72.5±6.4,P均<0.01).(4)0.1、1、10 μmol/L 4-HNE对兔中性粒细胞趋化数目(92±12、104±16、131±12)较正常对照组(72±12)均显著增加,10 μmol/L 4-HNE趋化数目显著高于0.1和1 μmol/L 4-HNE,差异均有统计学意义(P均<0.01).结论香烟所引起肺中性粒细胞趋化的结果可能与其促使4-HNE产生增加有关,银杏内酯B可以抑制CSC对4-HNE的诱生.

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中华结核和呼吸杂志

中华结核和呼吸杂志

2006年29卷4期

247-251页

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