吡嗪酰胺耐药性结核分枝杆菌的噬菌体检测技术研究

A study of the bacteriophage-based assay for the detection of pyrazinamide resistance in Mycobacterium tuberculosis

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摘要目的建立噬菌体生物扩增法(PhaB)快速测定吡嗪酰胺耐药性,并探讨其在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性测定中的应用价值.方法应用建立的PhaB测定108株结核分枝杆菌临床分离株的吡嗪酰胺耐药性,并与绝对浓度法的药敏结果进行比较,对不符合的菌株进行最低抑菌浓度(MIC)测定和序列测定分析.结果 PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的最佳测定条件为pH值5.5、药物浓度200 μg/ml、37℃作用48 h.用绝对浓度法检测108株结核分枝杆菌临床分离株,其中吡嗪酰胺敏感33株、耐药75株;用PhaB检测该108株结核分枝杆菌临床分离株,若以噬菌斑减少95%为判断标准,则吡嗪酰胺敏感32株,耐药76株.2种方法检测均为敏感的为28株,均为耐药的为71株,符合率为91.7%;2种方法检测结果不符的为9株,其中5株的PhaB结果与MIC结果相符,4株的结果不符,测序结果表明9株中有7株的PhaB结果与测序结果相符.如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的敏感性为94.7%,特异性为84.8%,阳性预测值为93.4%,阴性预测值为87.5%,准确性为91.7%.结论 PhaB测定吡嗪酰胺耐药性简便、快速,3 d即可获得药敏结果,可作为吡嗪酰胺耐药性的快速筛选方法.