换一批人肺癌转移相关蛋白1重组慢病毒载体的构建和病毒包装及其鉴定
Construction of human lung cancer metastasis related protein 1 recombinant lentiviral vector and virus packaging and identification
摘要目的 构建人肺癌转移相关蛋白1(LCMR1)重组慢病毒载体,并包装慢病毒颗粒,为进一步研究该基因在人肺癌发生发展中的功能提供实验基础.方法 将人肺癌转移相关基因LCMR1扩增后,酶切连接构建人pLVX-IRES-Neo病毒载体,转化DH5a大肠杆菌,挑取阳性克隆测序鉴定,将重组质粒与慢病毒系统一起转染Lenti-X 293T病毒包装细胞,并将收集的病毒感染肺癌细胞系95C,即时定量聚合酶链反应(q-PCR)及蛋白质印迹法验证其表达情况.结果 DNA测序结果证实成功构建人LCMR1重组慢病毒载体,包装后的病毒浓缩液浓度可达2.5×108 IFU/ml以上.包装后的病毒颗粒感染95C细胞系,LCMR1的mRNA水平提高9.98倍(P＜0.05),蛋白水平的表达也明显增强.结论 本研究成功构建了pLVX-IRES-LCMR1-Neo慢病毒载体,获得的慢病毒颗粒有效感染肺癌细胞系95C,为研究该基因在肺癌中的功能建立了模型.
更多相关知识
关键词
肺癌转移相关蛋白1慢病毒载体构建肺癌Lung cancer metastasis related protein 1Lentiviral vectorVector constructionLung cancer
分类号
R734.2（呼吸系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3760/cma.j.issn.1673-4777.2013.05.016
发布时间
2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览589
- 被引0
- 下载34
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
