慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒DNA序列异质性及准种特点的研究
The study on heterogeneity of hepatitis B virus DNA
目的以乙型肝炎病毒(HBV)基因异质性来探讨HBV准种群在慢性感染者中的存在状态.方法应用聚合酶链反应(PCR)法,自18例慢性患者血清中分别扩增前C/C基因、P基因逆转录酶区(RT)、HBV 全S区、X基因和全基因组序列,克隆入pGEM Teasy质粒,挑选81克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度.结果除外大段缺失突变的克隆,来源于同一患者前C/C区、RT区、全S区、X区和全基因组不同克隆之间的碱基序列同源性分别为98.0%~99.1%、98.7%~99.3%、97.5%00% 、93.0%~98.2%和96.6%~97.5%.前C区A83点突变、C抗原内部缺失较为常见,缺失突变、终止替换突变、短序列的插入或缺失突变造成的移框突变在各个区域中均可检出,X基因(核心蛋白启动子区,CP)内部缺失突变不仅导致X蛋白羧基端的多样性,而且调控HBeAg 的表达.编码截短型表面抗原中蛋白和缺陷病毒基因亦在患者外周血中.结论多区域测序结果提示HBV慢性患者体内HBV呈现准种群共存, X区(CP区)内存在热点缺失突变区,CP区的变异可能影响前C蛋白的表达,这些变异可能与患者不良预后有关.病毒蛋白的氨基酸的替换突变表现的个体特异性值得进一步研究.
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