结核分枝杆菌诱导小鼠树突状细胞凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响
Effects of Mycobacterium tuberculosis on apoptosis of mouse dendritic cells and activation of caspase-3, caspase-8
摘要目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)诱导小鼠树突状细胞株(DC2.4)凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响.方法:建立小鼠树突状细胞DC 2.4的人结核分枝杆菌H37Rv细胞混合培养模型.采用DAPI荧光染色法和透射电镜分析凋亡DC 2.4细胞的形态特征;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测DC 2.4细胞凋亡情况;分光光度法检测H37 Rv诱导DC 2.4细胞凋亡过程中caspase-3、-8活性变化.结果:H37 Rv与DC 2.4细胞混合培养2h后,即有细菌侵入,培养4、6、8、10、12h后,细菌侵入现象更明显,侵入率分别为(16.1±4.3)%、(35.8±5.1)%、(50.2±5.7)%、(58.3±6.2)%和(65.9±6.9)%.H37Rv与DC 2.4细胞混合培养6h后,DAPI染色荧光显微镜、透射电镜观察均发现DC 2.4细胞发生凋亡并出现典型的凋亡特征——染色质浓缩及边缘现象;DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性的凋亡条带.H37R与DC 2.4细胞混合培养6h、12 h和24 h后,细胞凋亡率分别为(6.4±2.5)%,(11.8±5.3)%和(31.1±8.7)%.caspase-3、-8活性增高,caspase-3活性于10 h 达高峰(2.01 +0.09) U/μg,而caspase-8活性则在6h达高峰(2.40±0.07) U/μg,两者与对照组相比均具有统计学意义(P<0.05),且caspase-8激活先于caspase-3.结论:结核分枝杆菌可诱导树突状细胞发生凋亡,其诱导凋亡的机制可能与caspase-3、-8活化有关.
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