换一批建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型
Establishment of optimized neuronal differentiation-promoting model derived from P19 embryonic carcinoma cells
摘要目的:建立P19胚胎癌细胞(embryonal carcinoma cells,EC)定向分化为神经样细胞体外模型,用于快速初步确定小分子化合物促神经发生活性.方法:采用单因素变量法进行培养条件探索,考察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,RA)浓度、悬浮天数、贴壁细胞密度和贴壁后培养液选择对分化的影响.4d后形成的拟胚体经胰蛋白酶消化为单细胞,并建立分阶段确定评价指标,适用于不同时相评价.光镜观察细胞表型,神经元特异蛋白β-tubulinⅢ免疫荧光染色加以确认.结果:P19细胞悬浮培养4d,加入RA(终浓度1μmol/L).以单细胞悬液在1.2×106/ml密度贴壁培养为最佳条件.光镜观察在第8天即有神经元样细胞表型,在第16天可形成神经元样网状结构,两个评价时间点免疫荧光染色均呈β-tubulinⅢ阳性,并与光镜表型相一致.结论:P19细胞分化为神经元样表型,为小分子促神经分化初级筛选提供模型.
更多相关知识
分类号
R965.1（药理学）
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2012.04.005
发布时间
2012-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30873068,90813026）
浙江省自然科学基金重点项目（Z2110655,Z12H310002）
- 浏览447
- 被引1
- 下载29
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
