胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的建立及其耐药机制研究

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摘要目的建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/DDP，并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法采用逐步递增顺铂浓度持续作用法诱导获得SGC7901/DDP，采用CCK-8法检测药物敏感性，并计算半数抑制浓（IC50）和耐药指数RI，流式细胞仪分析细胞周期分布与细胞内罗丹明123积累量；采用实时荧光定量PCR检测耐药相关基因MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、 MRP-5、ERCC1、 Survivin的mRNA表达，及凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA的表达。用Western blotting法检测耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP与其亲代药物敏感胃癌细胞株 SGC7901凋亡相关蛋白 Survivin及耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达。结果成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP，对顺铂的耐药指数为9.86，并对盐酸阿霉素，氟尿嘧啶交叉耐药，SGC7901/DDP细胞与亲本细胞SGC7901相比，生长缓慢，倍增时间延长，细胞周期分析发现S期细胞减少，G1、G2期细胞增多，细胞蓄积罗丹明123能力下降，MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2表达升高，细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3表达下降， Survivin、P-糖蛋白上升。结论耐药机制可能与MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2的表达上调和Bax、Caspase-3表达下调有关，以及Survivin与P-糖蛋白表达上调，提示多种耐药机制参与顺铂引起的胃癌细胞耐药。