蜕皮甾酮对糖皮质激素诱导成骨细胞增殖及分化的影响

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摘要目的观察β-蜕皮甾酮(β-Ecd)对糖皮质激素诱导的成骨细胞增殖及分化的影响及机制.方法取Wistar雄性大鼠,处死后分离培养BMSCs,消化传代.采用地塞米松(Dex)诱导培养成骨细胞,并分为空白对照组、Dex组、Dex+阿仑膦酸钠组、Dex+β-Ecd组.成骨细胞在96孔板上培养,在加入Dex基础上,分别加入阿仑膦酸钠、β-Ecd,作用处理24h、48h、72h,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖;碱性磷酸酶活性检测观察β-Ecd对成骨细胞分化的影响.采用转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测相关基因mRNA表达.结果诱导14d后,成骨细胞外基质呈强紫色,表明成骨细胞诱导成功.与空白对照组比较,Dex在较低浓度下能明显刺激碱性磷酸酶活性,在较高浓度时抑制碱性磷酸酶活性,且两者均呈剂量依赖性.不同浓度的β-Ecd对碱性磷酸酶活性的刺激作用与单用Dex和阿仑膦酸钠相似.Dex能显著降低Runx2和OCN的表达,而RANKL在mRNA和蛋白质水平上则均表现为显著增加.不同浓度的β-Ecd对Dex诱导的成骨细胞Runx2、OCN和RANKL表达的变化呈剂量依赖性的逆转作用.与空白对照组比较,低浓度Dex处理24h后细胞增殖明显增强,而高浓度则抑制细胞增殖.不同浓度的β-Ecd作用24h对细胞增殖无明显促进作用,但作用48h、72h与单用Dex处理比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 β-Ecd能以剂量依赖性的方式逆转Dex对成骨细胞分化和增殖的抑制.该结果将为β-Ecd治疗糖皮质激素性骨质疏松症提供强有力的理论支持.