一种新的柱前衍生法测定血浆同型半胱氨酸
A new precolumn derivatization method for the determination of homocysteine in plasma by high performance liquid chromatography
摘要目的:建立一种新的高效液相柱前衍生法,准确、快速测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度.方法:血中结合态的HCY经三丁基膦还原为游离HCY后,与衍生试剂7-氟苯唑-2-氧-1,3-二唑-4-磺酸胺(ABD-F)进行柱前衍生反应,衍生物经反相C18色谱柱,用0.15 mol/L磷酸盐缓冲液(pH=4.2)与甲醇按85∶15配制的混合液洗脱.荧光检测激发λ=385 nm,发射λ=515 nm.结果:在3.125~100.00 μmol/L范围内,HCY浓度与荧光强度的线性关系良好,γ=0.9998,测定的批内、批间变异系数分别为3.13%和5.10%,高低2种浓度的回收率分别为98.5%和92.7%,健康人血浆HCY的参考值为8.12±2.72 μmol/L.结论:本法测定血浆HCY准确快速、特异性高、分离效果好,适用于临床血浆HCY测定的常规需要.
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