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中国红豆杉紫杉烯合酶cDNA的分离、表达和鉴定

cDNA Cloning, Expression and Characterization of Taxadiene Synthase, a Diterpene Cyclase from Taxus chinensis

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摘要紫杉烯合酶是一种二萜环化酶,催化牛儿基牛儿基焦磷酸形成紫杉醇生物合成过程中的中间体紫杉烯.利用PCR扩增同源探针筛选cDNA文库,克隆了一个编码中国红豆杉(Taxus chinensis (Pilg.) Rehd.)紫杉烯合酶3′端的2 151 bp的cDNA片段,也通过PCR扩增得到了该基因5′端的611 bp的cDNA片段,将这两个cDNA片段拼接在一起,得到长2 712 bp的cDNA片段,具有一个2 586个碱基的开放阅读框架(ORF),编码包括质体转移肽在内的共862个氨基酸残基;该酶与太平洋红豆杉紫杉烯合酶有97%的同源性(identity),与其他植物萜类环化酶也有较高的同源性.利用融合表达载体pET-32a在大肠杆菌BL21trxB中表达,所表达的融合蛋白以包含体形式存在.包含体经过变性、复性和再折叠,利用His残基亲和凝胶柱层析得到融合的紫杉烯合酶.用毛细管气相色谱-质谱联用对酶促反应产物进行分析,结果表明,融合的紫杉烯合酶能催化产生4(5),11(12)-紫杉烯.

作者王伟 ^[1] 石青 ^[1] 朱平 ^[1] 欧阳涛 ^[1] 李秾 ^[1] 程克棣 ^[1] WANG Wei ^[2] SHI Qing ^[2] ZHU Ping ^[2] OUTANG Tao ^[2] LI Nong ^[2] CHENG Ke-di ^[2] 学术成果认领

作者单位中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所,卫生部天然药物生物合成重点实验室,北京,100050 ^[1] Key laboratory of Biosynthesis of Natural Products,Ministry of Public Health,Institute of MateriaMedica,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100050,China ^[2]

关键词中国红豆杉紫杉醇生物合成紫杉烯合酶 Taxus chinensis Taxol biosynthesis taxadiene synthase

医学主题词芸香科(Rutaceae)中国(China)性(Sex)环化(Cyclization)颏(Chin)

分类号 Q943.2（植物细胞遗传学）

栏目名称

研究论文

DOI 10.3321/j.issn:1672-9072.2002.02.011

发布时间 2005-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（39770180）

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