应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA的结合蛋白
Screening of Promoter Binding Protein of HCTP4 Transactivated by Hepatitis C Virus Core Protein from Human Liver cDNA Library by Phage Display
目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,探索HCTP4基因的表达调控机制.方法:应用噬菌体表面展示技术,以多聚酶链反应(PCR)技术扩增的HCTP4启动子DNA片段作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"富集过程,噬斑裂解液PCR扩增后,回收产物并进行克隆化,对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索.结果:噬菌体经富集后,筛选出12个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索,确定了与HCV核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合的蛋白有:核糖体蛋白L15、视网膜母细胞瘤结合蛋白8.结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HCV核心蛋白反式激活基因HCTP4启动子DNA结合蛋白,分析了这些蛋白的功能,为研究HCTP4的生物学调节机制,进一步阐明HCV核心蛋白的致病机制奠定了基础.
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