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桃红四物汤影响ERK磷酸化表达延缓小鼠胚胎成纤维细胞生长的机理研究

Mechanism Study of Taohong Siwu Decoction on Delaying Growth of BALB/c 3T3 Cells by Affecting ERK Phosphorylation

摘要目的探讨活血化瘀名方桃红四物汤(THSWD)减缓小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/c 3T3,3T3)生长和增殖可能的分子靶点及信号通路.方法在3T3细胞内分别过表达碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、沉默bFGF以及用PD98059阻断细胞内ERK上游信号通路;然后观察桃红四物汤对细胞活性,细胞周期,bFGF、ERK1/2及p-ERK1/2基因或蛋白表达的影响.桃红四物汤含药血清培养基浓度为20％,作用时间48 h.结果与正常对照组比较,桃红四物汤组的3T3细胞活性降低(P＜0.01);G0/G1期占比升高(P＜ 0.05,P＜0.01),S期占比降低(P＜0.05,P＜0.01);bFGF和ERK1/2基因表达降低(P＜0.01);bFGF和p-ERK1/2蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),ERK1/2蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05).与bFGF过表达组比较,bFGF过表达+桃红四物汤组的3T3细胞活性降低(P＜ 0.05);G0/G1期占比升高(P＜0.01),S期占比的差异无统计学意义(P＞0.05);bFGF和ERK1/2基因表达降低(P＜0.01);bFGF和p-ERK1/2蛋白表达降低(P＜0.01),ERK1/2蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05).与PD98059组比较,PD98059+桃红四物汤组的3T3细胞活性降低(P＜0.05);G0/G1期占比升高(P＜0.01),S期占比降低(P＜0.01);ERK1/2基因表达的差异无统计学意义(P＞0.05);ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05).由于bFGF基因的结构独特性及沉默引物设计的方法学缺陷,3T3细胞内未能沉默掉bFGF.结论桃红四物汤在3T3细胞中首先降低bFGF,进而降低ERK信号通路的标志性蛋白p-ERK的表达,减缓3T3细胞的增殖速度.