列当中Crenatoside神经保护作用的机制研究
Neuroprotective Mechanism of Crenatoside Extracted from Orobanche coerulescens Steph.
摘要目的:从列当中苯乙醇苷类成分Crenatoside(OC4)对D-半乳糖所致急性损伤的保护作用中,探讨调节cAMP/PKA/CREB信号通路的机制.方法:(1)根据MTT法检测细胞存活率确定给药OC4的剂量,以及D-半乳糖诱导PC12神经细胞损伤模型的剂量和作用时间.OC4孵育24 h后,ELISA法检测cAMP、PKA和BDNF的含量;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western Blotting免疫印迹分析检测CREB、p-CREB蛋白的表达水平.结果:给予PC12细胞16 g/L D-半乳糖40h后,MTT检测细胞存活率达(46.67±6.59)%,与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05),表明成功建立了细胞衰老模型.OC4作用24 h后,与D-半乳糖组相比,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平提高(P<0.05),MDA和LDH水平下降(P<0.05)(rMDA=-0.850,P<0.05);(rLDH=-0.927,P<0.05),p-CREB表达增加(P<0.05),并且有剂量依赖性(r=0.903,P<0.01).PKA特异性抑制剂H-89作用1 h后,p-CREB表达减少,PKA、cAMP、BDNF和SOD水平显著降低(P<0.05),MDA和LDH水平升高(P<0.05).结论:列当中Crenatoside对D-半乳糖诱导的PC12神经细胞损伤有明显的保护作用,其机制与上调cAMP/PKA/CREB信号通路有关.
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