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项目年度编号
0501100078
中图分类号
S859.797
成果公布年份
2003
成果简介
该课题是以非复制型痘苗病毒（删除痘苗病毒中2个毒力基因和2个宿主范围基因）为载体，研制高效、安全、价廉的新一代的基因重组狂犬病疫苗毒种。该课题已完成将中国狂犬病毒（5aG株）的糖蛋白（RG）基因重组至中国痘苗病毒天坛株的TK区，构建复制型重组痘苗病毒VTKRG， 以及以非复制痘苗病毒为载体，构建了单独表达RG的非复制型重组病毒VTKRG CKLaZ，和双表达狂犬病毒核蛋白（RN）、糖蛋白(RG)的非复制型重组病毒VTKRG△CNKlacZ基础上，现以VTKRG△CKNLacZ为亲本株，利用同源重组原理，删除C与K片断间LacZ基因，并将狂犬病毒核蛋白（RN）基因插入C-K片段间。采用G418-neo富集、蓝白斑及免疫蚀斑筛选等方法，构建不含报道基因LacZ的双表达狂犬病毒aG株G、N的非复制重组痘苗病毒VTKRGΔCKRN。经鉴定，非复制型重组病毒缺失性状能稳定地遗传，能有效地表达RG、RN。非复制型重组病毒在鸡胚成纤维细胞（CEF）中保持原有的繁殖能力，而在人源细胞中几乎不增殖；它们的乳鼠脑内毒力和家兔皮内毒力明显降低。裸鼠毒力实验表明VTKRG△CKRN较复制型重组痘苗病毒VTKRG病毒毒力显著减弱。免疫动物实验证实， VTKRG CKRN在小鼠和狗体内可同时诱生特异性中和抗体，且诱生的中和抗体滴度与复制型重组病毒VTKRG相当。非复制型重组病毒能保护小鼠和狗免于致死剂量标准攻击病毒CVS株、中国流行病毒SBD株的攻击。以上资料表明，非复制型重组病毒VTKRGΔCKRN具有良好的免疫原性和安全性。重组疫苗经疫苗效力试验、安全性、毒性实验检测，符合部颁标准。该研究为申请兽用疫苗批准文号提供实验依据。该研究成果达到国际先进水平，其重组病毒所用的基因和载体系统均为自行克隆和构建，具有自主知识产权，应用前景广阔并具有应用开发的价值。
完成单位
武汉生物制品研究所
完成人
黄薇 李萍 徐葛林 胡巧玲 朱家鸿 吴杰 王继麟 祝玉桃 严家新 李承平 郑新雄 薛红刚 刘碧芬
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