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项目年度编号
1000700391
中图分类号
R575.05 R-332
成果公布年份
2010
成果简介
肝纤维化是肝病向肝硬变转化的必经过程，阻止甚或逆转肝纤维化进程是改善患者预后提高患者生存质量的关键。研究认为，基质金属蛋白酶抑制因子(TIMPs)对基质金属蛋白酶(MMPs)的过度抑制是肝细胞外基质胶原纤维过度沉积的核心。课题应用RNA干扰技术构建抑制TIMP-1表达的特异载体TIMP-1pRNAT-U6.2siRNA(TIMP-1siRNA)，通过体外实验，筛选并验证其对大鼠肝星形细胞的转染效率及对TIMP-1表达、对基质胶原纤维的影响；体内试验，应用二甲基亚硝胺构建大鼠肝纤维化模型，应用超声造影剂微泡技术携带TIMP-1siRNA转染肝纤维化大鼠，观察其对大鼠血清学、肝组织结构形态学的影响，为肝纤维化的治疗提供高效、特异作用靶点，为治疗药物安全、定位释放于靶器官提供高效转载途径。该实验分四个部分：1.构建TIMP-1的siRNA载体。应用RNA干扰技术，在线及体外实验筛选出高效抑制TIMP-1的siRNA特异靶序列，并鉴定其对TIMP-1的沉默效应，为进一步观察其在体抑制TIMP-1基因表达制备应用工具。2.构建肝纤维化大鼠模型。观察大鼠肝纤维化过程中血清学及组织病理学，特别是肝组织内TIMP-1mRNA(原位杂交、双引物荧光定量RT-PCR)及蛋白(免疫组化)表达情况，奠定TIMP-1siRNA表达载体在体转染干扰肝纤维化进程的基础。3.TIMP-1siRNA表达载体经静脉注射，观察其在体内分布情况，肝组织内基因转染效率，基因抑制有效时间、稳定性及对血清学、肝组织生理病理学的影响。4.TIMP-1siRNA表达载体在超声造影剂微泡、超声辐照干预下在肝组织内转染效率，观察肝纤维化相关血清学指标(Elisa法TIMP-1、MMP-1、HA、LN、CP-Ⅰ、CP-Ⅲ)、肝组织病理学改变及胶原纤维含量变化。应用推广及效益：1.该课题研究导致肝纤维化胶原沉积的主要矛盾，采用具特异性、稳定性及高效性的干扰技术以阻止TIMP-1对MMPs的抑制，使MMPs发挥其降解基质胶原纤维的活性作用，有效降解肝窦周间隙过度沉积基质纤维，阻止肝纤维化进程，改善肝血供，有效改善肝组织病理，提高患者的生存及生活质量。2.该课题的延伸可进一步扩展到TIMP-1siRNA对体内心、肺、脑、肾脏疾病中纤维化的作用及在缓解眼角膜及皮肤瘢痕组织的治疗作用。3.课题研究特异药物导入患者体内的超声靶向微泡技术，极大减少药物用量，可使其定向释放于肝组织，避免药物对其他脏器的影响；同时该方法对所有昂贵及为避免药物对非靶向器官的作用而需定位治疗的药物均有靶向介导意义。4.该课题借用超声波转染基因药物的设计，包括微泡类别、频照时间和强度、药物在体内有效时间等，为超声技术携带药物治疗疾病提供较为全面的参考。
完成单位
河南中医学院 河南省肿瘤重点实验室 河南省人民医院
完成人
田力 张璞麟 孙慧君 蔡庆春 毕蓓蕾 陈奎生 袁建军 王凤丽 高园 李娜
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