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项目年度编号
1900120072
中图分类号
S942
成果公布年份
2019
成果简介
我国水产养殖品种多、规模大、集约化程度高，是农业增效、农民增收的主要支柱之一，但水产病害的威胁也日益严重，而水产病害防治的关键是预防和病害早期检测与诊断。针对病原诊断技术落后以及渔业科技成果供给与市场需求脱节的客观情况，广东省水生动物疫病预防控制中心主动出击，引导企业研发应用于水产病害现场快速检测的设备和试剂。
病原主要是病毒、细菌、真菌和寄生虫。根据不同病原微生物所具有的特异性核酸序列和结构进行测定，本技术适用于所有水产动物疫病病原的检测确诊。
本技术是在恒温条件下，利用Bst DNA聚合酶和根据靶基因序列设计的两对特殊的内、外引物，特异性识别靶序列上的6个独立区域，启动循环链置换反应。
利用饱和核酸染料对PCR反应无抑制作用的特性，通过加入过量饱和核酸染料来实现对恒温核酸扩增反应产物进行标记，在每30,s一个循环的激发光条件下，实时监测发射光的强度，实现实时监测合成的双链DNA的量。
以阳性质控品为模板，在恒温扩增反应体系中加入适量荧光染料后，以积累方式读取荧光值，呈现典型的“S”型扩增曲线。基于恒温扩增反应的特点以及不同浓度梯度阳性质粒和阴性核酸样本在扩增过程中荧光值的变化，编写阴阳性判定算法。
通过自主研发和技术引进，形成水产病害现场快速检测产品：1套固定的检测箱，检测箱中包括DhelixQ5水产病害检测仪1台，用于核酸提取的离心机、金属浴和振荡器各1台，不同量程的移液器1套；一套针对不同病原的检测试剂盒，目前共开发针对70余种水产病害病原测试剂盒。
完成人
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