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多种引起人类急性呼吸道感染的新型病毒的发现和分子生物学研究

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项目年度编号 2000070332
成果公布年份 2019
成果简介 主要技术内容:急性呼吸道感染是最常见和多发的一类疾病,其发病率在所有疾病中位居首位。下呼吸道感染是世界上造成5岁以下儿童死亡的主要原因,因此主要对医院呼吸道发热门诊患者和严重急性呼吸道感染(SARI)患者的咽拭子标本以及重症监护病房(PICU)患儿的鼻咽抽取物标本进行检测,对流感病毒(IFV)、禽流感病毒和几种新发现的人类呼吸道病毒-包括人偏肺病毒(hMPV)、人博卡病毒(HBoV)、WU多瘤病毒(WUPyV)、KI多瘤病毒(KIPyV)以及人冠状病毒(HCoV)HKU1和NL63等进行研究。通过摸索标本处理方法,提高从标本中提取病毒核酸的效率,摸索建立检测这些新病毒核酸的逆转录聚合酶链反应RT-PCR或PCR实验方法,优化反应条件,对这些病毒的全基因和部分蛋白基因序列进行测定、拼接和系统进化分析,以了解它们的分子生物学特征。还摸索建立了某些呼吸道新病毒感染的实时荧光定量快速检测方法。 技术创新程度:早前分析了福建省约8个流感流行季节甲3亚型IFV(H3N2)血凝素HA1基因演变特征,弄清了毒株变异与暴发流行的分子生物学基础;研究由于某些禽流感病毒H5HA基因突变而导致某些氨基酸改变所引起的蛋白质改变效果。检测表明在因呼吸道感染住进PICU的患儿中,8种呼吸道病毒的检出率以及混合感染的情况。同时与世界各国各种病毒毒株的基因序列进行比对和系统进化分析。种系分析表明福州地区hMPV存在A、B两种基因型;2株HCoV-HKU1属于HKU1基因型A。首次在福建省患儿体内发现了4种呼吸道新病毒;首次对该省H3N2HA1基因演变特点进行分析;在国内首次在体外对H5HA基因进行点突变以研究对HA功能的影响;首次建立了两种新型HCoV以及两种多瘤病毒的RT-PCR或PCR和实时荧光定量快速检测方法,检测时间比市售的商品化试剂盒快约半个小时。该研究为全球病毒基因库增添了在中国福建省分离出的14株H3N2HA1基因序列和在福州检测出的5种呼吸道新病毒的全基因组序列。其中KIPyV全基因组序列是国内唯一一株获得全基因组序列并上传GenBank基因数据库的。国内最早、与国外学者几乎同时在同一病人的呼吸道和排泄物标本中发现了WUPyV,证明该病毒除了呼吸道还有消化道传播的可能性。该研究开创了福建省多种人类呼吸道新病毒研究的先河,丰富了呼吸道发热症候群病毒病原谱的研究内容。 技术经济指标:该研究建立的几种新型呼吸道病毒的快速检测方法,检测费用只有市售商品化试剂盒的十分之一左右。 应用推广及效益情况等:该项目已在省内各地市疾控中心和不少医院得以推广应用。为各地市疾控中心实验室进行病原体诊断提供了技术支持,为快速诊断呼吸道病毒感染,迅速控制疫情等做出了贡献。为医院制定临床救治方案提供了十分重要的科学依据,及时挽救患者的生命,避免人类的恐慌,维护社会的安定和经济的发展。
完成人 修文琼 郑奎城 刘光华 谢剑锋 吴冰珊 欧剑鸣 黄萌 陈炜 康育兰 学术成果认领
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