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项目年度编号
2000240460
中图分类号
S763.3
成果公布年份
2020
成果简介
桉树是广西重要的用材树种，近些年桉树在广西的种植面积已经超过了3000万亩。近些年广西桉树占全国木材产量的比例逐年升高，现已超过30％。随着桉树面积的逐渐扩大，病虫害也开始逐渐增多，近些年重要的病虫害如桉树枝枯病、油桐尺蛾等已成为严重制约桉树产量的重要因素。而油桐尺蛾的防治现在仍是大面积使用化学农药为主，对周围的环境造成了一定的影响。该项目以油桐尺蛾核型多角体病毒为研究对象，期望通过筛选病毒的增效因子，在保持病毒高专一性特点的同时缩短其起效时间，达到高效防治油桐尺蛾的目的。同时，该项目在进行应用研究的同时进行了一系列基础性研究，为下一步更高地应用该病毒提供了有力的科学依据。
项目研究成果如下：
1、为建立可供油桐尺蛾基础生物学研究的油桐尺蛾中肠上皮原代细胞系，采用组织块法、胰酶消化法和机械分散法分别对油桐尺蛾中肠上皮组织细胞进行体外培养。结果表明：组织块法培养效果最佳，细胞贴壁较好且生长旺盛。细胞移入培养瓶72h可观察到细胞从组织块中迁移出来，呈细长梭形，随后数量增多形成网状集落，可维持良好的生长状态达60d。说明油桐尺蛾中肠上皮原代细胞的最佳培养方法为组织块法。
2、病毒分离纯化常见的方法均是针对于常见的直径较小的病毒，在单独或者联合使用超滤、层析、去污剂、超速离心等方法后可以得到纯化的病毒。但由于核型多角体病毒颗粒较大，利用分子大小进行分离纯化的方法均不能将其与细菌等微生物很好的分开。该研究通过对比蔗糖密度梯度离心、质粒提取、超速离心、微滤等方法，筛选出能高效去除病毒中细菌、真菌的方法，为后续纯化病毒提供了条件。
3、通过对比7种候选增效因子与油桐尺蛾核型多角体病毒混合后的半数致死时间，筛选出荧光增白剂CXT、Bt以及BmNPV为具有增效作用的增效因子，后结合对环境、其他昆虫的影响，选用Bt为后续应用的增效因子。
4、对油桐尺蛾核型多角体病毒侵染前后的油桐尺蛾转录组利用第二代测序技术进行了测序。对组装后的转录组数据进行了整体分析，并对不同组别间的转录组进行了分子特性异同方面的分析。这些结果能够为宿主在病毒侵染后分子生物学方面的反应提供一定的证据。
5、为了扩大油桐尺蛾核型多角体病毒宿主域和实现规模化生产，将其与家蚕核型多角体病毒共同侵染油桐尺蛾幼虫，后交替饲喂家蚕及油桐尺蛾，以此获得能感染油桐尺蛾和家蚕的自然重组病毒新株系，并对该株病毒进行超微结构鉴定和毒力测定。结果表明，第1代和第3代重组病毒的超微形态和大小接近于亲本BsNPV，第2代重组病毒则与亲本BmNPV更接近，其大小介于亲本BmNPV与P1、P3之间。P3侵染油桐尺蛾幼虫的LT50比亲本BsNPV提前1.79d。因此，该试验获得的重组病毒对油桐尺蛾的杀虫活性增强。
6、该项目在国有东门林场建立油桐尺蛾防治试验林500亩，利用Bt+油桐尺蛾核型多角体病毒防治油桐尺蛾，经查定防治效果为81.3％。
7、研究内容在SCI、中文核心期刊上发表论文3篇，并在3个国际学术会议上进行报告交流1次，墙报交流2次；申请专利1项。
完成单位
广西壮族自治区林业科学研究院
完成人
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