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暗色环纹炭团菌的分离方法

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项目年度编号 2000241919
中图分类号 S432.44
成果公布年份 2020
成果简介 一、背景及意义:近年来,对三七原材料的需求日益增长,但是栽培过程中的真菌病害严重影响了三七生长。三七黑斑病能侵染三七植株和地下根系,以茎、叶、花轴受害较重,根部感染后呈褐色湿腐状,四季均可发生。三七圆斑病可为害植株各个部位,叶片发病初期叶背面呈现黄色小点,在天气潮湿或连续阴雨天,迅速扩大成透明状圆形,可引起芽腐和茎基腐。三七灰霉病以危害叶为主,多从下部老叶的叶尖或近地部分叶柄发病,灰褐色病斑,腐烂。在广西三七的传统产区,由于低海拔及高温多湿的气象条件,这种病害往往是同时发生的,造成了三七的大量减产甚至绝收。在三七种植上,防治真菌病害过度依赖化学农药,大量化学农药的使用不仅影响了三七的品质,也造成了三七药材的大量农药残留。因此,开展生物防治三七真菌病害对三七产业的可持续发展是非常迫切和必要的。为此筛选出能同时拮抗这些病害的拮抗菌具有重大意义。 二、技术原理及性能指标:该发明首次在三七中分离得到具有拮抗三七病原菌的生防菌-暗色环纹炭团菌:1、取三七的茎部,用流水将其冲洗干净,进行无菌消毒处理,在无菌条件下去除表皮组织,加入无菌水研磨得到研磨液,再用无菌水将研磨液稀释至其体积的1000倍,得到稀释液;取稀释液涂布于改良的PDA培养基上,置于28℃的培养箱中分离培养54h,得到多个菌落;再将多个菌落在改良的PDA培养基上进行纯化培养54h,培养温度为28℃,得多种菌株,然后将获得的多种菌株转移至改良的PDA培养基上增殖培养54h,培养温度为28℃,置于4℃环境下保存,备用;其中所述改良的PDA培养基包括PDA、0.1mg琥珀酸钠和150mL的三七茎叶原浆;2、将步骤一中保存的多种菌株分别和三七黑斑病病原菌进行对峙培养5d,对峙培养温度为28℃,筛选出抑制率大于或等于90%的菌株,经DNA鉴定后,确定为暗色环纹炭团菌。 三、技术创造性及先进性:该发明为国内首创,具有操作简单,效果显著的特性,对防治三七等广西特色药材三七上发生的多种病害具有极强的防治作用,对发展广西特色药材产业具有重要意义。 四、技术成熟度,适用范围和安全性:该发明提供一种暗色环纹炭团菌分离的方法及其应用,此制备方法经多次重复验证,技术成熟、简单、易操作,不仅对三七灰霉病病原菌、三七圆斑病病原菌病原菌、苦玄参褐斑病病原菌、艾纳香条斑病病原菌、广西莪术叶斑病病原菌、草豆蔻叶斑病病原菌和罗汉果斑枯病病原菌菌丝有很好的抑制作用,还对其孢子萌发具有很强的抑制作用。可见,暗色环纹炭团菌是一株优良的生防菌株,能在很大程度上减少农药的使用,对环境安全,对植物安全。 五、应用情况及存在问题:该发明已经在广西那坡等三七主产区进行推广使用,暂无技术上的问题。
完成人 蒋妮 叶云峰 缪剑华 陈乾平 韦树根 冯世鑫 翟勇进 白隆华
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