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项目年度编号
2200210550
中图分类号
R733.4
成果公布年份
2022
成果简介
1、课题来源与背景：课题来源于广西自然科学基金项目(2017GXNSFAA198107)。弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是全球发病率最高的成人非霍奇金淋巴瘤类型，约占非霍奇金淋巴瘤的30％～40％。DLBCL是高度异质性的肿瘤群体，2016年世界卫生组织(WHO)淋巴样肿瘤分类更新对DLBCL亚型的区分超过10种。基于免疫组化的Hans模型，按细胞起源将DLBCL分为GCB(germinal center-like，生发中心样)亚型和non-GCB(non-germinal center-like，非生发中心样)亚型。生存分析研究结果显示，GCB亚型预后好于non-GCB亚型。DLBCL其他相关的预后指标还包括P53、CD5、bcl-2、c-myc等。R-CHOP为主的一线化疗方案，使DLBCL患者总体缓解率达到75％～80％，3～5年无进展生存率达到50％～60％。然而，仍有约30％的患者治疗反应不佳，预后与现有的评估指标不尽相符。DLBCL在生物学特征、临床表现、治疗反应和预后均存在明显差异，因此，深入研究DLBCL的发病机制，发掘精准诊断和预后评价新指标，筛选特异性治疗靶点，具有积极的意义。
2、研究目的与意义：(1)阐明DLBCL中miR-542-3p、RAF1、MAPK3的表达特性及临床意义；(2)分析miR-542-3p对DLBCL恶性生物学行为的影响，明确miR-542-3p是否通过靶向RAF1、MAPK3参与DLBCL的发生发展及其分子机制，丰富microRNA在DLBCL中的研究理论；(3)初步探讨miR-542-3p作为DLBCL诊断标志物、预后评估指标及治疗靶点的可行性。
3、主要论点与论据：该课题通过miRNA-seq、芯片技术发现miR-542-3p在各种组织中存在着不同丰度的表达，在淋巴瘤组织中呈现低表达的趋势，且具有一定区分癌和正常组织的能力。通过11个miRNA预测软件和DAVID、STRING软件富集靶基因的方法发现，原癌基因丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶(RAF1)和丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)是miR-542-3p潜在的核心靶基因。通过IHC和芯片测序数据分析RAF1在DLBCL中的表达，IHC结果显示60例DLBCL病例RAF1阳性率(90％)高于对照组20例(20％)。经筛选共纳入5个基因芯片，共229个DLBCL样本和155个非肿瘤样本，整合标准化均数差(SMD)和SORC曲线表明RAF1在弥漫大B细胞淋巴瘤的低表达有统计学意义，并且能较好的区分癌与非癌能力。与DLBCL的临床病理和预后分析，K-M曲线表明低表达的RAF1与不良预后相关。进一步对RAF1作用机制的探讨，对RAF1正相关基因进行通路富集分析发现除了各种激酶信号通路外，RAF1可能与CD8阳性T细胞、CD4阳性T细胞、中性粒细胞、NK细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞呈正相关，与免疫纯度和T调节细胞呈负相关，并且RAF1与绝大多数免疫相关分子显著正相关，表明RAF1可能通过免疫浸润和免疫标志物的的表达影响DLBCL的进展。整合mRNA芯片发现miRNA-542-3p的靶标MAPK3在DLBCL及对照组表达无统计学意义，通过IHC实验证实以上结果。TCGA数据库分析MAPK3在48例DLBCL中表达与临床参数的关系，结果表明MAPK3在DLBCL的表达与有无肿瘤复发密切相关。通过双荧光素酶方法在HEK293细胞中验证miR-542-3p与RAF1、MAPK3靶向关系，结果显示它们之间无靶向关系。
4、创见与创新：首次采用qRT-PCR和免疫组化方法结合公共数据检测分析miR-542-3p、RAF1、MAPK3在DLBCL石蜡包埋组织中的表达特性及临床意义，比较DLBCL组、惰性淋巴瘤组、反应性增生淋巴结组中miR-542-3p、RAF1、MAPK3的表达情况；进一步分析其表达与患者临床病理参数及预后之间的关系，并且初步探索可能的作用机制。双荧光素酶报告基因实验，验证了miR-542-3p与RAF1、MAPK3之间不存在靶向结合关系。该研究完成了既定的考核指标，发表论文2篇，培养硕士研究生2人。
5、社会经济效益，存在的问题：该课题尚未进行成果转化和应用，暂未带来社会经济效益。
6、历年获奖情况：无。
完成单位
广西医科大学
完成人
顾永耀 贺菽嘉 曾晶晶 庞玉艳 莫伟嘉 李春瑶 莫超华
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