换一批
换一批摘要目的：构建大鼠Uqcrfs1基因的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达，为进一步研究其生物学意义提供实验基础。方法：以大鼠肾组织总RNA为模板，分别在上下游引物5'端引入特异酶切位点，应用RT- PCR方法扩增出编码Uqcrfs1的cDNA。将PCR产物克隆至pUM-T载体，经限制性内切酶消化及测序，证实为Uqcrfs1 cDNA序列后，将Uqcrts1/pUM-T重组子亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His。经限制性内切酶鉴定及测序正确后，采用磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293下细胞，同时转染载体pcDNA3.1/V5-His及绿色荧光蛋白，分别作为对照以及观察转染效率的参照。结果：RT-PCR方法检测到Uqcrfs1 mRNA的表达，Western Blot方法检测到融合蛋白的表达，pcDNA3.1/V5-His空载体转染组、HEK 293T细胞组均未在转录与蛋白表达水平检测目的基因产物，结果达到预期。结论：本研究成功构建了大鼠Uqcrfs1基因的重组质粒，该重组质粒可在HEK 293T中过表达。
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