换一批
换一批摘要本研究首先构建了结核分枝杆菌肽脱甲酰基酶(PDF)的表达载体pET-28a-def,并成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达,进而对蛋白进行了纯化,获得纯度较高且具有活性的蛋白。为了能够大量筛选微生物次级代谢产物,本研究建立了基于荧光测定的高通量药物筛选模型,并通过考察一系列温度、底物浓度、酶浓度以及反应时间对酶活性测定的影响,对筛选模型进行了优化。随后本研究还考察了DMSO浓度、反应体系中各种成分对酶活性的影响,并对孔板的稳定性、均一性进行评价,所建模型的信噪比S/N=32.41,CV阴性=3.78％,CV阳性=8.05％,z’=0.73；无明显漂移和边缘效应,均符合高通量模型筛选的要求。本研究利用所建立的高通量筛选模型对本所的12400个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,同时用纸片扩散法检测样品对耻垢分枝杆菌的抗菌活性。经过3次生物学重复,最终得到12个抑酶和抗菌活性都较好的微生物发酵液样品。本此研究期望在微生物次级代谢产物中发现新的抑酶活性和抗菌活性都较好的抑制剂。
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作者
学术成果认领
主题词
高通量筛选分析(High-Throughput Screening Assays)代谢(Metabolism)抗结核药(Antitubercular Agents)研究(Research)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)
会议名称：
2011抗感染药物与耐药菌防控专题研讨会
南宁
2011年
主办单位：
分类号
R965.1
发布时间
2012-06-25
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