摘要目的:通过建立稳定表达miR-145的卵巢癌细胞系(SKOV3-miR145-CMV-RFP),进行裸鼠移植瘤实验.探讨microRNA-145对卵巢癌细胞体内增殖的影响.方法:建立miR-145-CMV-RFP-SKOV3稳转细胞系.设计miR-145shRNA引物序列,合成序列,与载体连接,慢病毒包装,慢病毒感染SKOV3细胞和筛选稳定细胞系的感染SKOV3细胞.验证其融合程度,使SKOV3细胞稳定表达miR-145.建立裸鼠皮下移植瘤模型.将裸鼠随机分为SK-OV-3组、SK-OV-3-rfp组SK-OV-3-rfp-shRNA组.每只裸鼠背部皮下注射0.1 mL的细胞悬液,接种后观察成瘤情况.成瘤后,每3天用游标卡尺测量一次肿瘤的长径和宽径,按照体积计算公式计算瘤体积并绘制肿瘤生长曲线.根据肿瘤生长情况,30天后称量裸鼠体重,之后脱颈处死,并完整剥离各组皮下肿瘤,分别拍照记录肿瘤大小.摘取肿瘤组织,采用Western Blot检测肿瘤组织中MUC1蛋白表达水平.结果:1.成功构建miR-145-CMV-RFP-SKOV3稳转细胞系,验证其融合程度:LvX-MOCK-CMV-RFP感染SKOV3细胞,融合度达到90%以上,LvX-miR-145-CMV-RFP感染SKOV3细胞,融合度达到90%以上.使SKOV3细胞能稳定表达miR-145.2.miR-145-CMV-RFP-SKOV3对裸鼠体内SKOV3细胞移植瘤的抗肿瘤作用.皮下接种细胞后观察裸鼠成瘤大小,计算肿瘤体积大小,每三天测量一次,绘制肿瘤生长曲线.与SK-OV-3组比较,接种细胞悬液SK-OV-3-rfp-shRNA组裸鼠肿瘤生长速度缓慢并且肿瘤体积明显减小(P<0.01).与SK-OV-3组比较,SK-OV-3-rfp组裸鼠肿瘤体积减小,但无统计学差异(P>0.05).Western Blot检测结果表明:与SK-OV-3组比较,SK-OV-3-rfp-shRNA组裸鼠肿瘤组织中的MUC1蛋白表达量明显下调(P<0.01).与SK-OV-3组比较,SK-OV-3-rfp组裸鼠肿瘤组织中的MUC1表达量无明显变化(P>0.05),结果表明,miR-145可能通过下调MUC1的表达来抑制卵巢癌SK-OV-3细胞的增殖.结论:miR-145-CMV-RFP-SKOV3对裸鼠体内SKOV3细胞增殖有明显的抑制作用,可能与通过下调MUC1蛋白表达有关.
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